En présence d'eau et d'iode, l'acide alkyl sulfureux est oxydé dans une réaction qui consomme de l'eau. La réaction s'arrête lorsque toute l'eau a été consommée et qu'un petit excès d'iode indique le point final du titrage. Le titrage Karl Fischer peut être effectué manuellement ou de manière entièrement automatisée.